Thủ công so với Tự động “chọn phương pháp nào để đếm tế bào?

Máy đếm tế bào RWD C100

Thủ công so với Tự động “ chọn phương pháp nào để đếm tế bào?

Nuôi cấy tế bào là một bước quan trọng trong nghiên cứu sinh học tế bào. Để đảm bảo tế bào phát triển khỏe mạnh và tạo điều kiện thuận lợi cho các thí nghiệm tiếp theo, các nhà nghiên cứu phải xác định đường cong tăng trưởng của tế bào và hiểu trạng thái tăng trưởng của chúng trong quá trình nuôi cấy tế bào, do đó cần phải đo nồng độ tế bào, khả năng sống sót và nồng độ trước các thí nghiệm tiếp theo. Thông thường, các phương pháp đếm tế bào bao gồm đếm thủ công và đếm tự động

Bài viết này giới thiệu những ưu điểm và nhược điểm của phương pháp đếm tế bào thủ công và đếm tế bào tự động, đồng thời giới thiệu chi tiết về hai phương pháp này.

Ưu điểm và nhược điểm của đếm tế bào thủ công và tự động

Method Counting Time Single Counting Accuracy Cluster Sample Analysis Biological Hazard Secondary Calculation Visual Field Area Data Management Consumable Cost Labor Cost
Manual Cell Counting 5min/sample Low Rough Calculation Yes Yes 1 sq. mm Manual Low High
Automated Cell Counter 9sec/sample High Accurate Separation No No 3.5 sq. mm Automated Slightly Higher Low

Đếm tế bào thủ công

Đếm tế bào thủ công, được phát triển bởi nhà giải phẫu học và mô học người Pháp Louis-Charles Malassez vào thế kỷ 18, từ lâu đã được coi là tiêu chuẩn vàng để đo nồng độ tế bào.

Quy trình đếm tế bào thủ công bằng hemocytometer/ huyết cầu kế

Thủ công so với Tự động “chọn phương pháp nào để đếm tế bào?

Quy trình đếm tế bào thủ công bằng huyết cầu kế

1 Thu hoạch và nhuộm tế bào
Thu hoạch huyền phù tế bào và nhuộm bằng thuốc nhuộm xanh trypan hoặc AO/PI

2 Làm sạch huyết cầu kế
Làm sạch máy đo huyết cầu kế sau đó để khô tự nhiên hoặc sử dụng máy sấy. Và bạn cũng có thể chọn các dung môi hữu cơ như  ethanol 95%, ethanol tuyệt đối hoặc acetone để khử nước. Đảm bảo không cọ rửa máy đo huyết áp bằng vật cứng.

3  Định vị nắp đậy sau đó nạp mẫu
Đặt tấm phủ thích hợp lên trên máy đo huyết cầu kế để tạo thành buồng đếm. Dùng pipet nhỏ một giọt huyền phù tế bào lên mép của tấm kính phủ và để huyền phù tế bào chảy vào buồng nhẹ nhàng và đều, tránh tạo bọt khí.

4  Quan sát và định vị bằng kính hiển vi
Tìm một trường nhìn thích hợp dưới kính hiển vi và quan sát mẫu tế bào. Điều chỉnh tiêu điểm để có được chế độ xem rõ ràng và tìm hình vuông mục tiêu. Khi sử dụng thuốc nhuộm AO/PI, sử dụng kính hiển vi huỳnh quang để quan sát.

5 Đếm thủ công dưới kính hiển vi
Nhìn vào mẫu dưới kính hiển vi và đếm số lượng tế bào bằng tay. Số đếm này được lặp lại ba lần, có tính đến các ô có kích thước khác nhau và giá trị trung bình được lấy.

6 Tính toán nồng độ
Tính nồng độ tế bào trong mẫu bằng cách sử dụng công thức chuyển đổi và dữ liệu được ghi lại. Nếu sử dụng phương pháp nhuộm xanh trypan, hãy tách các tế bào sống ra khỏi tổng số tế bào.

7 Làm sạch huyết cầu kế – hemocytometer
Làm sạch máy đo hemocytometer như mô tả ở trên và cất giữ để sử dụng trong tương lai

Kịch bản ứng dụng đếm tế bào thủ công

Đếm tế bào thông lượng thấp

Lưu ý

  • Việc vệ sinh máy đo huyết cầu kế thông thường có thể gây ra các nguy cơ sinh học.
    ● Do chất liệu của máy đo huyết cầu kế, các vết trầy xước trên bề mặt có thể ảnh hưởng nghiêm trọng đến kết quả thí nghiệm
    ● Các tạp chất còn sót lại có thể gây ra sự phân bố tế bào không đồng đều
    ● Dư lượng từ chất tẩy rửa có thể ảnh hưởng đến khả năng sống của tế bào
    ● Một số ô được nhóm lại nên được tính là một ô, trong khi các mẫu có nhiều cụm hơn cần được nối lại và đo
    ● Nguyên tắc đếm cho các ô được nhấn trên đường lưới phải được xác định trước

Đếm tế bào tự động bằng Máy đếm tế bào RWD C100

Mặc dù bảng đếm tế bào máu được coi là tiêu chuẩn vàng để đếm tế bào, nhưng vẫn có những vấn đề cố hữu với thiết kế và sử dụng.

Máy đếm tế bào tự động đã được phát triển để khắc phục những vấn đề này.
Có ba loại máy đếm tế bào tự động phổ biến: máy đếm tế bào tự động dựa trên trường nhìn, máy đếm tế bào kiểu Coulter và máy đếm tế bào dòng chảy.

Trong số này, bộ đếm tế bào tự động dựa trên trường nhìn quan sát tạo ra kết quả tương tự như đếm thủ công, hiện là tiêu chuẩn vàng, do tốc độ đếm cao và các nguyên tắc tương tự. Bộ đếm tự động có thể phát hiện tế bào và hạt, sau đó áp dụng thuật toán để đo nồng độ tế bào, kích thước và các thông số khác. Điều này cho phép xác định nồng độ và số lượng hạt giống tế bào, cũng như khả năng sống sót và tăng sinh của tế bào

Quy trình đếm tế bào tự động với máy đếm tế bào tư động RWD C100

Máy đếm tế bào RWD C100
Quy trình đếm tế bào tự động

(1) Thu hoạch và nhuộm tế bào.
(2) Nạp mẫu lên lam đếm dùng một lần
(3) Đưa lam đếm vào thiết bị
(4) Thiết bị hiển thị kết quả đếm ngay lập tức

Ứng dụng đếm tế bào tự động

Đếm tế bào thông lượng cao.

Bộ đếm tế bào tự động có thể được sử dụng với nhiều loại thiết bị quang học khác nhau và do đó có thể được nâng cấp lên bộ đếm tế bào tự động huỳnh quang để phát huỳnh quang kép AO/PI trực tiếp

Lưu ý

(1) Các thông số đếm nên được cài đặt dựa trên mẫu
(2) Hệ số pha loãng trước phải được nhập trước
(3) Cần kiểm tra độ chính xác của lấy nét tự động và bất kỳ sai lệch nào phải được khắc phục ngay lập tức.

Tóm lược

Máy đếm tế bào RWD C100
So sánh hai phuong phap

Tóm tắt về đếm tế bào thủ công và tự động

Đếm tế bào thủ công bằng máy đo huyết cầu kế thường dễ bị sai sót. Bên cạnh đó, việc vệ sinh máy đo huyết áp không đúng cách có thể gây nguy hiểm sinh học. Để so sánh, đếm ô tự động vượt trội hơn so với đếm ô thủ công về độ chính xác của dữ liệu và hiệu quả tốc độ. Hơn nữa, theo Dược điển Hoa Kỳ-Công thức quốc gia (USP-NF) khuyến nghị sử dụng ít nhất hai phương pháp trở lên để xác định khả năng sống sót của tế bào sau khi phục hồi. Ngoài nhuộm xanh trypan trường sáng, phương pháp nhuộm AO/PI thường được sử dụng để đếm tế bào sống dựa trên huỳnh quang. Do đó, bộ đếm tế bào tự động có khả năng phát huỳnh quang thuận tiện hơn cho cả đếm tế bào dựa trên trường sáng và huỳnh quang, khiến nó phù hợp hơn cho các kịch bản nghiên cứu sinh học tế bào hiện tại.

Xem thêm video giới thiệu về máy đếm tế bào tự động của hãng RWD do Công ty Thiết bị Ngày Nay đại diện phân phối tại Việt Nam:

Trả lời

Email của bạn sẽ không được hiển thị công khai. Các trường bắt buộc được đánh dấu *

error: Content is protected !!